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          管式離心機剪切力對菌體蛋白收率和濁度的影響

          2019-07-31

          菌體破碎裂解液的澄清工藝是以去除細胞碎片和核酸為主,而這兩種物質在偏堿性的裂解緩沖液中一般都是帶有負電荷,這可能是由于吸附溶液中的離子或者是本身偏酸的等電點電離導致的。鈣離子的絮凝是鈣離子靜電作用吸附膠體外表的負離子,接著架橋作用,把顆粒連接成一種疏松的、網絡狀的聚集形態,即造成了絮凝體。形成的大顆粒沉淀再進行離心便可實現對破碎裂解液的澄清。鈣離子對破碎裂解液絮凝澄清效果的研究分為三個部分:
          一方面要考察鈣離子的加入量對澄清效果的影響以及磷酸氫二鈉的加入量對絮凝工藝的影響;

          另一方面要考察料液性質對澄清效果的影響以及絮凝工藝對料液穩定性的相對影響;
          第三,鑒于絮凝澄清工藝受設備參數影響較明顯,增加考察關于放大過程的模擬評價,相比小試優化使用的臺式離心機,試生產所使用管式離心機的剪切力作用對蛋白和絮凝效果是否有一定程度的影響,將使用具有剪切力的儀器模擬進行效果評估。因為,破碎裂解液的雜蛋白成分復雜,絮凝工藝只能在一定程度上少量去除雜蛋白甚至目的蛋白,進而不能直接使用檢測蛋白濃度計算澄清收率進行評估,在后續的試驗中我們得知管式離心機剪切力是造成蛋白的斷裂或變性;離心樣品渾濁度嚴重上升說明可能是剪切力造成斷裂新形成的雜質或剪切力破壞了未牢固結合的絮凝大顆粒,尤其表現在20mmol/L氯化鈣濃度絮凝樣品。由此進- -步確認氯化鈣濃度的最佳操作值為30mmol/L 氯化鈣和剪切力確實降低絮凝澄清樣品的收率和澄清度。而且,雖然可能管式離心機產生的剪切力沒有模擬剪切力的強烈,但在一定程度上將影響蛋白收率和樣品濁度,可以增加離心后過濾操作去除部分顆粒。

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